第四节 自身抗体检测

    抗核抗体(antinuclear antibody，ANA)

    ANA是最常出现于自身免疫性风湿病（结缔组织病）患者血清中的一组自身抗体的总称。其靶抗原为真核细胞核成分，但也包括某些细胞质和细胞骨架成分，无种属特异性和器官特异性。

    IIF法：正常人血清中ANA阴性（不同试剂盒判定阳性的滴度不同，有的为>1:40，有的定为>1:80，有的定为>l:100）。

    ELISA法：定性试验阴性；

    定量试验< 40U/ml。

    1．测定ANA对很多自身免疫性疾病有诊断价值，在不同疾病中，特别是风湿性疾病，其抗体谱有一定的特征性。重要的有：全身性红斑狼疮(SLE)、药物诱导的狼疮、混合性结缔组织病(MCTD)，ANA检出率可达95%~100%；干燥综合症为70%~80%，进行性全身硬化症(PSS)检出率可达85%~95%，其他如类风湿性关节炎、多发性肌炎及皮肌炎、慢性活动性肝炎、溃疡性结肠炎等也有20%~50%的检出率。此外，桥本甲状腺炎、重症肌无力、多发性动脉炎等患者也可检出ANA。

    2．用荧光抗体法检测ANA时不同荧光图谱可见以下几点：

    (l)均质型：此型与抗组蛋白抗体、抗DNA抗体及抗核小体抗体引起，几乎所有活动性SLE患者均可检出此型抗体，但多种其他自身免疫性疾病此抗体的检出率也可达20%~30%。

    (2)周边型：此型抗体所针对的靶抗原是膜孔复合物和板层素。针对前者的抗体多见于SLE患者，针对后者的抗体可见于慢性自身免疫性肝炎的活动期。

    (3)斑点型：与此型相关抗体有抗U1nRNP、抗Sm、抗scI70、抗SS-B、抗SS-A、抗Ki、抗Ku及抗其他非组蛋白抗体，多见于混合型结缔组织病(MCDT，也可见于SLE和60%以上的进行性全身性硬化(PPS)患者。

    (4)核仁型：此型与核糖体、U3 -RNP、RNA聚合酶的抗体有关，除SLE外，硬皮病患者阳性率可达40%。

    (5)着丝粒型：抗着丝粒抗体对局限型全身性硬化症有很高的敏感性和特异性，阳性率可以达到80%~95%。

    3．测定结果判断受主观因素影响较大，因此荧光染色图谱只有相对参考意义，不能据此作出定论，必要时应进一步作特异性ANA检测。

    1．ELISA法影响因素较多，标本要防止溶血，因红细胞中含有过氧化物酶．红细胞裂解后造成标本溶血，过氧化物酶释放于血清中，与试剂中的辣根过氧化物酶作用相似，易造成假阳性。

    2．要注意hook效应，即标本含量过高时，由于抗原一抗体比例不合适，易出现假阴性结果。

    3．抗心律失常药物，如普鲁卡因胺、肼苯达嗪，异烟肼，苯妥英钠，保泰松等药物可引起假阳性。

    4．洗涤次数要适当，防止洗涤不彻底致假阳性或洗涤过多致假阴性，要严格按照试剂盒说明书要求进行操作。

    抗双链DNA抗体(anti-double stranded DNA antibody，an-ti-dsDNA)

    抗DNA抗体可分为两种基本：抗双链DNA抗体或天然DNA和抗单链或变性DNA。

    IIF法：正常人血清中抗dsDNA抗体滴度<1:10。

    RIA法：正常人血清中抗dsDNA抗体结合率≤0.20(20%)。

    1．抗ds-DNA自身抗体是SLE最重要的标志性自身抗体。

    2．抗ds-DNA抗体对SLE特异性很高，尤其当检测试剂中所用的ds-DNA不含单链或变性片段且阳性滴度较高时，对SLE特异性可达85%。RA患者阳性率最多为1%；干燥综合征、MCTD阳性率在10%以内。

    3．高滴度抗ds-DNA抗体提示SLE处于活动期。此抗体直接与肾小球细胞内DNA结合或与循环中的DNA结合形成免疫复合物沉积于肾小球基底膜，故与狼疮性肾炎密切相关、特别是当血清补体C3、C4水平降低。

    待测血清最好于采集当日检测。

    抗ENA抗体(antibodies to extractable nuclear antigen，ENA)

    ENA为可提取性核抗原的简称，有三个组成部分：组蛋白、DNA、可溶性核抗原。现已发现有临床诊断价值的包括S(ss-B)、PM-1等10余种抗原，抗ENA抗体为其总称。

    免疫印迹法：正常人血清中抗ENA抗体为阴性。

    目前临床已将抗ENA抗体检测作为结缔组织病的重要诊断标准之一，蛋白质印迹法可同时检测数种多肽抗体，但与免疫电泳法比较其阳性率并无明显提高，因此ENA抗体阴性，不能排除某种风湿病的可能性。

    1．抗Sm抗体主要见于SLE及其重叠综合征，有学者认为抗Sm抗体可作为SLE的标志性抗体，也有报告认为抗Sm抗体阳性的SLE患者，雷诺现象较多，可发生肾脏病变，预后不良，与其相反的观点是抗Sm抗体阳性与SLE活动期和肾脏损害无关，不能 作为判断SLE及临床活动、好转和疗效的依据。

    2．抗RNP抗体见于多种风湿病患者，SLE患者的阳性率30%~50%；PSS25%～30%；皮肌炎10%～20%；RA5%一10%，该抗体滴度通常较低。在混合性结缔组织病(MCTD)患者，阳性率为lOO%。因此，高滴度的抗RNP抗体被认为MCTD的诊断标志。抗RNP，但混合性结缔组织病患者阳性率可达95%~100%，且效价很高。抗RNP抗体阳性与肌炎、食管运动功能障碍、雷诺现象相关，但阳性患者多不发生肾炎。

    3．抗SS-A和抗SS-B抗体为干燥综合征的标志性抗体。

    4．抗Scl-70为全身性硬皮病的标志性抗体。

    5．抗Jo-l抗体被认为是肺病相关肌炎的标志性抗体。

    6．抗Rib抗体主要见于SLE患者，阳性率为10%—40%，在其他疾病中很少出现，可视为SLE的另一标志性抗体

    标本要新鲜，取血后及时检测；所用器皿要清洁，防止蛋白酶对ENA的破坏。

    抗组蛋白抗体(antihistone antibodies，AHA)

    组蛋白是核内最丰富的蛋白质，它与DNA结合组成染色质，无种属特异性和器官特异性，易与DNA、Ig及补体成分结合，正常人群常为阴性。

    ELISA法：正常人血清抗组蛋白抗体为阴性。

    1．抗组蛋白抗体多见于95%的药物性狼疮患者，也见于30%~70%SLE，15%~50%的RA患者。

    2．在Felty's综合征患者中，抗组蛋白抗体检出率可达83%，RA相关的血管炎患者阳性率为75%，青年型类风湿性关节炎(JRA)患者阳性率为20%在非风湿性自身免疫疾病中，原发性胆汁 性肝硬化患者约有76%抗组蛋白抗体阳性。

    3．组蛋白亚型较多，在做组蛋白总抗体检测时，最好同时检测抗H2A、H2B抗体，以排除药物性狼疮。

    抗心磷脂抗体(anti-cardiolipin antibody，ACA)

    抗磷脂抗体是一组针对各种带负电荷磷脂的自身抗体，其中以ACA最为重要。ACA是以心磷脂为靶抗原的一种自身抗体，能干扰磷脂依赖性的凝血过程，抑制内皮细胞释放前列环素，与凝血系统改变、血栓形成、心脑血管缺血性疾病等密切相关。

    ELISA：正常人血清中抗ACA抗体阴性。

    1．ACA阳性主要见于各种自身免疫病（如SLE、类风湿性关节炎、干燥综合征、皮肌炎、硬皮病等）患者中。在肿瘤、AIDS、麻风、疟疾、血小板减少症、脑卒中、心肌梗死、反复自发性流产者、抗磷脂综合征（包括血栓形成、自发性流产、血小板减少、CNS病变等）

    患者中也有较高的检出率，且高滴度的ACA可作为预测流产发生及血栓形成的较为敏感的指标。

    2．从Ig的类型来看，风湿病以IgG型ACA为主；脑血栓患者以IgG型AcA阳性率最高，且与临床密切相关；约70%ACA阳性孕妇可发生自发性流产和宫内死胎，尤其是IgM型ACA阳性可作为自发性流产的前瞻性指标；ACA阳性患者血小板减少发生率明显高于阴性者，以IgG型ACA多见，并... -->>
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